产品描述：
本公司研发的 SP2/0 细胞培养基是一款专为杂交瘤筛选而开发的无血清培养基，适用于 Sp2/0
细胞的连续传代和放大培养，可促进杂交瘤细胞的生长，提高电融合效率及亚克隆克隆率。
产品规格：
主要成分：
⚫ 酚红
⚫ D-葡萄糖
⚫ L-谷氨酰胺
⚫ 碳酸氢钠
注意事项：
1. 本品仅供科学研究及体外诊断使用，严禁用于临床。
使用方法：
在杂交瘤筛选的不同实验阶段，需要用到不同成分类型的的培养基，其配制方法如下：
杂交瘤细胞的细胞复苏
以一管冻存细胞体积 1.0mL，活细胞密度 5×10
6个/mL 为例：
1. 准备 15mL 离心管，加入预热的 10mL 的 Sp2/0 细胞培养基。
2. 在 37℃水浴中，迅速解冻细胞。当最后一丝冰融化时，迅速从水浴中移出冻存管。
3. 生物安全柜中，将细胞悬液全部转入第 1 步准备的离心管中，1,000rpm 转速下离心 5min。
4. 吸弃上清，用 Sp2/0 细胞基础培养基重悬，并转到 15cm 细胞培养皿中，终体积 30mL。
5. 放置于静置培养箱中（37℃，湿度 80%，5%CO2）。
6. 复苏 2~3 天后观察细胞状态，当细胞汇合率达到 80%以上或培养基颜色变黄时需进行传代处理。
杂交瘤细胞的传代培养
以 15cm 细胞培养皿为例：
1. 当细胞汇合率达到 80%以上时，需进行传代处理。用移液器吹打杂交瘤细胞使细胞脱落。
2. 转至 50mL 离心管，1,000rpm 离心 5min。
3. 弃上清，细胞用适量 Sp2/0 细胞基础培养基重悬，并取样计数。
4. 建议细胞按照 1~3×10
6个/皿细胞密度传代。培养皿置于培养箱中（37℃，湿度 80%，5%CO2）。
5. Sp2/0 细胞用于电融合时，尽量使细胞处于对数生长期，可在融合前两天，按照 3×10
6
/皿的细胞
密度传代至所需细胞量。
杂交瘤细胞电融合后的筛选
1. 电融合结束后，静置 5 分钟，将细胞转到含有 50mL HAT 完全培养基的离心管中。置于培养箱
静置 1h，使融合细胞状态稳定。
2. 用 HAT 完全培养基调整细胞密度，建议将细胞按照 30,000~50,000 个/孔细胞密度铺板 96 孔板。
孔板置于培养箱，37℃，5%CO2。
3. 铺板第 4~5 天左右，可更换新鲜的 HAT 完全培养基。铺板第 7~9 天左右可进行检测。
杂交瘤细胞的亚克隆铺板
以 48 孔板多克隆细胞为例：
1. 检测到阳性克隆时应尽快铺板亚克隆，以防止阳性细胞丢失。
2. 用枪头混匀杂交瘤细胞并取样计数。
3. 采用 HT 培养基按照 0.5~2 个/孔细胞密度进行铺板亚克隆。
4. 孔板置于培养箱中（37℃，湿度 80%，5%CO2）培养。
5. 铺板第 0、1、2、7 天时进行拍照。当细胞团占孔板底部约 1/4~1/2 时可取样进行检测。
