产品保存:
试剂盒在室温(15-25 ℃) 干燥条件下保存一年。
产品说明:
本试剂盒采用异硫氰酸胍法溶胶,利用硅胶膜离心柱特异地吸附DNA,可从 TAE 或 TBE 琼脂糖凝胶中高效地回收纯化 DNA 片段,操作简单、快速,纯化后得到的产物可直接用于酶切、连接、转化、测序等多种实验。
试剂盒组成:
Component |
GE50 |
GE200 |
Buffer QG |
30 mL |
120 mL |
Wash buffer |
10 mL |
40 mL |
Elution Buffer |
5 mL |
10 mL |
Collection Tubes |
50 个 |
200 个 |
注:使用前加入推荐体积的无水乙醇至Wash buffer中, 所有离心均在室温下进行。
操作步骤:
1、切割琼脂糖凝胶中的目的 DNA 条带,放入干净的离心管中称重,如凝胶重 100 mg,可视为 100 μL(100 mg≈100 μL),以此类推。
2、加入3倍体积 Buffer QG,于55 ℃水浴中溶胶6-10分钟,间断(2-3分钟)混合,确保胶块完全融化,当胶完全融化后,观察溶液的颜色,如颜色为紫色,则需加入3 M(pH 5.2)的醋酸钠溶液,调整颜色至 Buffer PB相近。(为增加DNA的回收量,可加入1倍体积的异丙醇于已融化的凝胶溶液中,例如凝胶重100 mg,则加入100 μL 的异丙醇)。
3、待融化的凝胶溶液温度降至室温后,加入收集柱中静置1分钟,10000 rpm 离心1分钟,弃流出液。
4、加入650 μL Wash buffer,10000 rpm 离心1分钟,弃流出液。
5、10000 rpm 离心1-2分钟,彻底去除残留的 Wash buffer。
6、将收集柱置于一干净的离心管中,开盖静置1分钟,在柱的中央膜上加入30-50 μL 的 Elution Buffer 或 ddH2O,室温静置1分钟。为提高纯化产量,可选择 60 ℃-70 ℃预热的 Elution Buffer 或 ddH2O ,10000 rpm 离心1分钟,洗脱 DNA,洗脱出的 DNA于-20℃保存。
注意事项:
-为了保证回收效果,电泳时请使用新鲜的电泳缓冲液。
-割胶时,胶块尽量小;溶胶时,确保胶块完全融化。
-紫外照射会对 DNA 造成损伤,影响下游的实验(如克隆、连接),尽量缩短紫外照射时间。